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C反应蛋白超敏检查实验ELISA试剂盒,人胎球蛋白A检验试剂盒

点击: 98 次  来源:http://www.010zws.com 时间:2020-01-14

核心提示:人胎球蛋白A检测试剂盒

核心提示:25-OH 维他命D检测试剂盒

核心提示:C反应蛋白超敏检测ELISA试剂盒德国DRG进口原装货号:EIA3954 规格96T德国DRG中国独家代理商深圳科润达生物工程有限公司

人胎球蛋白A检测试剂盒德国DRG原装进口,货号:EIA4522德国DRG中国独家代理商“深圳科润达生物工程有限公司”竭诚为您服务

25-OH 维他命D检测试剂盒(德国DRG原装进口,货号:EIA5396)德国DRG中国独家代理商“深圳科润达生物工程有限公司”竭诚为您服务

C反应蛋白超敏检测ELISA试剂盒德国DRG进口原装货号EIA3954 规格96T德国DRG中国独家代理商深圳科润达生物工程有限公司

预期用途此试剂盒可用于血清,血浆,细胞上清,组织提取物和尿液中人胎球蛋白A也称之为α-2-HS糖蛋白的定量的检测;血清或血浆中胎球蛋白A的检测可作为某些癌症及基因遗传缺陷的血清蛋白诊断的辅助工具;此试剂盒仅供实验室专业人士使用简介胎球蛋白A也称之为α-2-HS糖蛋白,是由两个氨基末端抑制域和一个较小的羧基末端域组成的59 kDa 分子量的糖蛋白;由肝脏合成,分泌至血流,成年哺乳动物体内的浓度范围在0.5-1.0g/L;婴儿期的血清胎球蛋白A含量高,参与蛋白酶抑制活性,与钙代谢和骨生成调节相关;累积于骨和牙齿内,作为生物学上非胶原骨蛋白的主要部分,研究表明,胎球蛋白A是循环中主要的钙化抑制剂;干涉钙盐沉淀;近期研究显示低水平胎球蛋白A的慢性肾脏衰竭患者与心血管病的高死亡率显著相关;另一方面,糖尿病老年人血清胎球蛋白A含量比正常人高,这是独立于胰岛素抑制剂的其他标记物;另外,高胎球蛋白A水平还可作为心血管疾病的的危险标记物实验原理此试剂盒可用于血清样本中人胎球蛋白A的定量检测;采用双位点夹心法,羊抗人胎球蛋白A多抗结合人胎球蛋白A的不同位点将含人胎球蛋白A的试验标准品,质控品和预稀释样本加至包被了高度亲和羊抗人胎球蛋白A多抗的微孔内,第一次孵育,包被抗体捕获样本中的人胎球蛋白A,未结合的蛋白洗板除去,然后加入HRP标记的抗人胎球蛋白A酶联物加入至每孔,“夹心-人胎球蛋白A-HRP-标记的酶联物”形成夹心,未结合的示踪抗体通过洗板除去,结合于包被板上的HRP酶免物与底物液定时反应,然后在酶标仪上检测;结合于包被胎球蛋白A上示踪抗体酶活性与样本中胎球蛋白A的含量直接相关,在点对点或三次回归模式下以标准品的浓度比上OD值绘制标准曲线,样本中的胎球蛋白A可直接从标准曲线上得到试剂:准备与贮存此试剂盒收到后立即贮存于2-8℃下,效期见试剂盒标签;所有成分在2-8℃下可保存至有效期使用前,所有试剂平衡至室温,不同批次的试剂不能交换使用

预期用途此试剂盒用于血清和血浆中总25羟基维他命D(维他命D2和维他命D3)的检测实验原理此试剂盒基于竞争酶联免疫法首先,由于体内多数循环25-OH VD 束缚于VDBP,因此结合样本需先经过变性缓冲液的预处理来提取分析物;中和反应后,生物素化的25-OH VD与过氧化物酶标记的链霉亲和素加入,混匀,加入微孔板内,样本中的内源性25-OH VD与25-OH VD-生物素酶联物竞争结合包被板上包被的VDBP,结合的生物素化的25-OH VD由过氧化物酶标记的链霉亲和素检测,孵育,洗板,除去未结合的成分,加入底物液发生颜色反应,一定的时间后加入终止液;颜色强度与样本中的25-OH VD浓度成反比注意事项

用于体外诊断用存储于2 °C – 8 °C.产品专利名C反应蛋白超敏检测试剂盒预期用途此超敏CRP ELISA检测试剂盒能用于人血清中C反应蛋白的定量检测.检测C反应蛋白可用于感染,组织损伤,炎症和相关疾病的辅助检测.简介C反应蛋白于1930年首次由Tilet和Francis在肺炎患者血清中鉴别出来,因其能结合和沉淀肺炎球菌C多糖而得名.它是一种分子量约为110,000-140,000道尔顿,由5个相同亚单位组成的α球蛋白.C反应蛋白在肝脏中合成,正常情况下血清和血浆含量很少,浓度约为0.3 mg/dl.它具有广泛的生理学意义,但与其它免疫球蛋白具有几种相似的功理,主要表现为机体防御.C反应蛋白是种急性期蛋白,在多种疾病的非特异性反应过程中,患者血清和血浆中的含量水平都会剧增.在格林-巴利综合征,多发性硬化,特定的病毒感染,肺结核,急性传染性肝炎,多种神经和炎症疾病,灼伤和外科术后的病人体内也能观察到高浓度的C反应蛋白.尽管检测血清中C反应蛋白上升的浓度不能作为特定疾病的指标,但对于多种炎症的病发研究是很有意义的.急性组织损伤后,在24-48小时内血清或血浆中C反应蛋白的浓度就迅速上升,急性期间达到顶峰,创伤或炎症治疗后,其浓度立即下降.人血清或血浆中C反应蛋白的浓度,在降至正常水平前会持续几天的上升.检测C反应蛋白可作为炎症病变过程的标记物,甚至比红细胞沉降速度这种指标更可靠和灵敏.因为红细胞沉降速度会受到非炎症进程机体的生理变化的影响.常见检测C反应蛋白的方法包括:乳胶凝集试验,比浊法,放射免疫扩散法.但这些方法的灵敏度都很低,而ELISA方法的灵敏度和特异性更高.由于上升浓度的C反应蛋白往往与病理改变存在紧密联系,故也可作为诊断,治疗,炎症监测和相关病症的有效辅助工具.此外,通过高灵敏度的方法检测C 反应蛋白也可增强其它心肌标记物的预测价值,有利于心血管和外围血管疾病的风险评估.由于C反应蛋白值的上升为非特异性,所以需结合患者病历评估与先前的检测值作对比进行分析.实验原理超敏CRP检测试剂盒基于酶免法原理,试验中采用了抗CRP的特异性单克隆抗体,包被板上包被了抗CRP抗体鼠单抗,,HRP标记的抗CRP抗体羊抗,试验样本与这两个抗体反应,样本中CRP分子在固相抗体和酶联物抗体之间,室温下45min孵育过后,洗板,除去未结合的标记抗体,TMB底物液加入,孵育20min,变成蓝色,以1N HCL终止颜色反应,变成黄色样本中的CRP浓度与颜色强度成正比,450nm处检测吸光值试剂盒组成

  1. 包被板,96孔,包被了抗人胎球蛋白A抗体;微孔板固定于板架上,密封于含有干燥剂的铝箔密封袋内;贮存于2-8℃至有效期
  2. 胎球蛋白A示踪抗体,1瓶,0.6 ml,浓缩,HRP标记的抗人胎球蛋白A示踪抗体溶于稳定的蛋白基质中;此试剂使用前需用示踪剂抗体稀释液进行稀释;贮存于2-8℃至有效期
  3. 示踪抗体稀释液,1瓶,11ml,即用,Trizma盐酸溶于缓冲液;根据实验步骤用于示踪抗体稀释;贮存于2-8℃至有效期
  4. 试验缓冲液,浓缩,1瓶,11ml,含牛血清白蛋白的磷酸缓冲盐;建议使用前以1:10比例用双蒸水稀释(如11 ml浓缩+99 ml的双蒸水);贮存于2-8℃至有效期
  5. 洗涤液,浓缩,1瓶,20ml,30倍浓缩;试验前需用580ml的双蒸水稀释,混匀;一旦稀释,不含叠氮化物防腐剂的磷酸缓冲盐洗涤液会含表面活性剂;稀释的洗涤液在室温下可保存至效期
  6. HRP底物液;1瓶,12ml,含过氧化氢的TMB底物液;贮存于2-8℃至有效期
  7. 终止液,1瓶,12ml,0.5M硫酸,贮存于2-8℃至有效期
  8. 胎球蛋白A标准品,5瓶,含胎球蛋白A,不含叠氮化物防腐剂的液态牛血清基质;各标准品浓度见瓶子标签;3次冻存周期使用后,所有标准品保存至-20℃或更低
  9. 胎球蛋白A质控,2瓶,含人胎球蛋白A,不含叠氮化物防腐剂的液态牛血清基质,各质控的精确浓度范围见瓶子标签,3次冻存周期使用后质控保存至-20℃或更低
  1. 此试剂盒仅供研究及专业人士使用
  2. 试剂盒内所有含有人血清或血浆的试剂都经FDA批准进行了检测,HIV I/II, HBsAg 和HCV都呈阴性;但在使用及处理时还应视潜在生物危险物质
  3. 实验前,详细阅读完说明书。使用试剂盒内提供的有效版本说明书,确保理解所有操作步骤

  4. 包被板条为可分拆板条。未使用的微孔板放入密封的小袋中,置于2℃- 8℃下存储5. 按相同的顺序迅速加样品和试剂6. 每种不同试剂都用单独的容器盛放,特别是底物液。将底物液盛放在曾经保存过酶联物的容器中,会导致变色。切勿将试剂倒回小瓶中,避免污染7. 为得到最佳结果,充分混匀微孔中的溶液。别重复使用包被板8. 实验过程别让微孔静置干燥。各步骤加试剂后,应充分洗板9. 实验前,将所有试剂平衡至室温。温度会影响实验读数,然而,样品的测量浓度值不受影响10. 切勿用嘴移液,避免皮肤和黏膜接触试剂和样品11. 别在样品和试剂处理实验区吸烟,饮食和化妆12. 处理样品和试剂时,请戴一次性手套.微生物感染的试剂盒样本会导致错误的实验结果.13. 根据相关国家生物有害物质安全条例或规范操作14. 别使用过期的试剂, 有效期见标签15. 严格依据说明书要求,所有试剂的加样量准确。只有使用标准移液管和标准酶标仪才能得到最优结果16. 不要将不同批次的试剂混合使用,也不建议将同一批次的板条进行互换,试剂盒装运或储存的环境不一样也会导致结果有微小的不同17. 避免接触酸性终止液,以免灼伤和刺激皮肤18. 有些试剂盒含Proclin 300, BND或MIT作为防腐剂。如不慎接触眼睛或皮肤,用大量清水冲洗19. TMB底物液对皮肤和粘膜有刺激作用。如不慎接触眼睛,用大量的清水冲洗,如不慎接触皮肤,用香皂和清水清洗。如不慎吸入,带伤者至空气流通的地方20. 化学物质和试剂盒必须根据相关国家生物有害物质安全条例或规范进行处理21. 有关生物危害的详细信息见物料安全数据单, 物料安全数据单可直接向DRG公司获取试剂盒组成

  5. 包被板,96孔,可拆,包被了维他命D结合蛋白

  6. 标准品,6瓶,1ml,即用,浓度:0-4-10-25-60-130pg/ml;转换:1 ng/mL = 2.5 nmol/L.标准品根据NIST SRM校准;含无汞防腐剂
  7. 高低质控,2瓶,1ml,即用,质控品具体数值及范围见QC指控单,含无汞防腐剂
  8. 变性缓冲液,1瓶,10ml,即用
  9. 中和缓冲液,1瓶,25ml,即用,含无汞防腐剂
  10. 酶联物,1瓶,7ml,即用,生物素化维他命D3,含无汞防腐剂
  11. 酶联混合物,1瓶,7ml,即用,链霉亲和素-过氧化物酶,含无汞防腐剂
  12. 底物液,1瓶,25ml,即用,TMB
  13. 终止液,1瓶,14ml,即用,含0.5M的硫酸
  14. 洗涤液,1瓶,30ml,40倍浓缩
  15. 盖板,1块
  1. 包被板,96孔,包被有抗CRP小鼠单抗
  2. 标准品,1.0ml/支,浓度分别为:0;0.005;0.010;0.025;0.050;0.100mg/L,, 含防腐剂,即用
  3. 样本稀释液,50ml/支,含磷酸缓冲液-BSA溶液,含防腐剂
  4. 酶联物,12ml/支,含HRP标记的抗CRP羊抗,含防腐剂
  5. TMB底物液,11ml/瓶,TMB
  6. 终止液,11ml/瓶,1N 盐酸

安全注意事项

注意:根据需要可额外订购样本稀释用的零标准品实验所需材料但试剂盒未提供

实验所需器材但试剂盒未提供

  1. 此试剂用于临床参考实验室,仅供医生或实验室专业人士体外诊断用
  2. 若试剂是有潜在感染风险的,试验操作和处理时应戴手套
  3. 避免接触含TMB,过氧化氢,硫酸的试剂,TM,B会刺激皮肤和粘膜,导致皮肤过敏反应;TMB还可能是致癌物质;皮肤接触到硫酸会导致严重灼伤,不要接触到眼睛,皮肤,衣服,不要吸入烟雾,一旦接触,应立即用大量水冲洗至少15min
  4. 良好实验室操作规范
  1. 用于维他命D释放的玻璃瓶
  2. 孵箱37℃
  3. 酶标仪(450±10nm)
  4. 校准的移液器
  5. 吸水纸
  6. 去离子水或双蒸水
  7. 计时器
  8. 半对数坐标纸或数据处理软件
  1. 精确移液器:5ul;10ul;50ul;100ul;1.0ml
  2. 一次性枪头
  3. 酶标仪
  4. 混合器或相关仪器
  5. 吸水纸
  6. 坐标纸

实验所需材料但试剂盒未提供

贮存条件未开封的试剂在2-8℃下可保存至有效期,不要使用过期的试剂开封的试剂和包被板必须贮存于2-8℃,密封袋一旦打开后,应立即密封好开封的试剂盒若按上述方法保存可保持2个月的活性试剂准备实验前将所有试剂和试验所需板条平衡至室温洗涤液30ml的浓缩洗涤液+1170ml的去离子水混匀,得到1200ml的即用型洗涤液,稀释的洗涤液可在室温下保存2周试剂盒处理根据相关国家规范处理废弃试剂盒. 试剂盒的特别信息见物料安全数据单损坏的试剂盒万一试剂盒或试剂成分受到损坏,收到试剂盒最迟1周以书面形式通知DRG. ,严重受损的试剂组分不能用于实验.保存受损试剂组分,直至找到好的解决方法. 根据官方规范处理损坏组分.样本此次试验采用血清或血浆(EDTA;肝素;柠檬酸盐血浆)样本不要使用溶血,脂血,黄疸血样本注意:不要使用含有叠氮化物的样本样本采集血清静脉采血采集全血,立即凝集,室温下离心分离出血清;样本未完全凝集前不能离心;接受抗凝剂治疗的病人可能需要更长的凝集时间血浆将全血采集至含有抗凝剂的采血管内,离心便可样本贮存和准备样本采集后盖好盖子,2-8℃下可保存3天;若要保存更长时间,则需冻存于-20℃;避免反复冻融样本稀释初次试验中,若出现样本的浓度值高于最高标准,则需将样本进行进一步的稀释,并重新检测,最终结果应乘以相关的稀释因子例如:A)1:10稀释 10ul的血清+90ul的零标准品1:100稀释 10ul A)1:10稀释的+90ul的零标准品实验步骤一般注意事项–使用前,将所有的样品和试剂平衡至室温。试剂混匀,避免产生气泡–实验开始后,所有步骤应无中断连续进行下去–使用新的一次性加样枪头,加标准品,质控品,样品,避免交叉污染–吸光度值是受孵育时间和温度影响。实验前,请准备好所有的试剂,打开瓶盖,保证所需包被板条置于板架上确保所有的加样时间间隔相等,无间断–一般情况,酶反应与时间和温度成线性相关试验操作每次实验都应建立标准曲线所有标准品,样本和质控都做双孔检测;所有的标准品,样本和质控都在同一时间内操作,确保实验环境一致样本预处理步骤

贮存条件

  1. 精确的单通道移液器,10-25-100-1000ul
  2. 适于100 ul的可重复用分液器
  3. 适于所有体积的一次性枪头
  4. 一次性玻璃管或塑料管12x75mm或13x100mm
  5. 带盖的一次性塑料瓶;100-1000ml
  6. 铝箔纸
  7. 双蒸水或去离子水
  8. 塑料盖板或聚乙烯薄膜
  9. 多通道洗涤瓶或全自动洗板系统
  10. 酶标仪,450nm
  1. 将试验所需的玻璃瓶或未包被的包被板固定好
  2. 每玻璃瓶加25ul的标准品,质控和样本,每次加样更换新枪头
  3. 每玻璃瓶加50ul的变性缓冲液
  4. 盖上盖子,37℃下孵育30min
  5. 每玻璃瓶加200ul的中和缓冲液
  6. 每玻璃瓶加50ul的酶联物
  7. 每玻璃瓶加50ul的酶联物混合物
  8. 充分混合10秒,充分混合这一步相当重要;然后吸取200ul 此混合溶液用于ELISA试验
  1. 未开封的试剂盒可在2-8℃下保存至有效期
  2. 保持微孔板保存于含有干燥剂的密封袋内,尽可能避免接触潮湿的空气

样本采集人胎球蛋白A的检测所需血清或血浆样本量仅10 ul个人在采样前无需特殊准备,全血采集,室温下立即凝集30min,然后离心分离出血清(850-1500 xg 10min)。全血采集3小时内需将血清从凝集中分离出来,转移至另一干净试管;血清样本可保存在-20℃或更低,避免超过三次的冻融建议采用24小时尿液来检测尿液中的胎球蛋白A;采集第二天早晨的尿液,排除采样前刚进行剧烈运动的,因肾功能不全导致多尿的;由利尿药引起的人体内尿蛋白含量波动降低,可能与尿肌酸酐浓度相关;细胞上清,组织提取物则需进行试验样本的倍比稀释;多个平行样检测得到更精确的试验结果实验步骤患者样本的准备患者血清或血浆样本在检测前需用试验缓冲液进行1:10000 的稀释

ELISA 步骤

试剂准备

  1. 以1A和1B 标记两个试管
  2. 加1ml的试验缓冲液至各试管
  3. 加10 ul的患者血清至1A试管,混合
  4. 从1A管内吸取10ul已稀释的样本至1B试管,混合
  1. 将实验所需板条固定于板架上
  2. 加200ul上述已预处理的标准品,质控品和样本于相应的微孔内
  3. 盖板,37℃下孵育60min
  4. 弃去孔内反应液,每孔加300ul的洗涤液洗板4次,吸水纸上拍干
  1. 实验前将所有试剂平衡至室温
  2. 实验前病人血清应稀释100倍,如5ul的血清+495ul的样本稀释液;

注意:建议采用精确/经校准的移液器,稀释过程小心操作,得到更精确的结果;建议采用多通道12.5ml的Eppendorf可重复移液器加1ml的试验缓冲液,而不用50ml的枪头患者尿液样本的实验前用试验缓冲液1:100的稀释

注意:试验的灵敏度和精确度与洗板是否彻底紧密相关

标准品不需要稀释

  1. 以1标记一试管
  2. 各管加1ml试验缓冲液
  3. 加10ul患者尿液样本至1管,混合
  1. 每孔加200ul的底物液
  2. 室温下孵育15min
  3. 每孔加100ul的终止液
  4. 加完终止液后10min内在酶标仪450±10nm处读数
  1. 稀释后的样本CRP浓度仍超过了10mg/L时,应进一步进行稀释(如10ul 已100倍稀释的样本+90ul样本稀释液)

注意:若所得结果中样本浓度高于5个标准品中的最高标准品浓度,则尿液样本需进一步稀释,然后重新检测试剂准备

结果计算

样本采集与准备

  1. 试验前将所有试剂平衡至室温,不同批次的试剂不能混合使用
  2. 使用前,试验缓冲液及洗涤液需进行稀释,配制成工作液;详情请见“试剂”部分
  1. 计算各标准品,质控品和样本的吸收值均值
  2. 在半对数坐标纸或线性坐标纸上以标准品的浓度为X轴,吸收值为Y轴,绘制标准曲线
  3. 以样本的吸收值可从标准曲线上得到相应的浓度值
  4. 自动计算方法:说明书中的标准曲线是通过4参数逻辑函数法计算得到,4PL是最佳方法,其他的方法可能会有些许的偏差
  5. 样本浓度可直接从标准曲线上读取;若样本浓度值高于最高标准品,则需进一步稀释重新检测或结果记录为>130ng/mL;最终结果计算时应乘以相关的稀释因子
  1. 此试验需使用血清样本
  2. 标准静脉采血技术采集样本,采集后60min内分离出血清
  3. 24小时内样本不使用的话,需贮存于-20℃或更低,可保存6个月
  4. 避免使用溶血,脂血或浑浊样本
  5. 样本不能反复冻融,不要将样本贮存于无霜冷冻机内,冻存的样本和浑浊样本或含有其他微粒物质的样本,在使用前都需要进行离心

试验操作

本译文仅供参考,请以原说明书为准中国独家总代理:深圳市科润达生物工程有限公司办公地址:深圳市坪山区坑梓街道中兴路14号中城生命科学园第一分园A栋301研发地址:深圳市坪山区坑梓街道中兴路14号中城生命科学园第一分园A栋301B联系电话:0755-26814430传真:+86 755 26814431免费订货电话:800-8306296。技术咨询:座机,0755-26680196;手机,15711973608;邮编:518122 E-mail:kerunda@szonline.net。官方网址:www.kerunda.com.cn欢迎索取详细资料,在线Email:kerunda_tech@163.com

操作注意事项

  1. 将实验所需板条固定于板架上,标准品,质控品及未知样本做双孔检测
  2. 试验布局
  1. 加样建议:所有标准品,样本和质控加样应在3min之内完成
  2. 所有标准品,样本和质控都做双孔检测
  3. 加入终止液后15min内读数
ROW STRIP 1 STRIP 2 STRIP 3
A STD 1 STD 5 SAMPLE 2
B STD 1 STD 5 SAMPLE 2
C STD 2 C 1 SAMPLE 3
D STD 2 C 1 SAMPLE 3
E STD 3 C 2
F STD 3 C 2
G STD 4 SAMPLE 1
H STD 4 SAMPLE 1

实验步骤

  1. 加25 ul的标准品,质控品及预稀释的1:10000样本至相应孔内;注意:尿液样本是1:100的稀释
  2. 每孔加100 ul的试验缓冲液
  3. 混匀,盖板,避免暴露于阳光下
  4. 室温下孵育2小时
  5. 示踪抗体工作液的准备,示踪抗体1:21的用示踪抗体稀释液稀释;每条板需1ml的示踪抗体稀释液+50 ul的胎球蛋白A示踪抗体
  6. 移去盖板,弃去孔内反应液,每孔加350ul的洗涤工作液洗板5次,然后彻底吸出孔内液体,或可采用全自动洗板机
  7. 以上稀释的示踪抗体工作液加100 ul至各孔
  8. 盖板,避免暴露于阳光下
  9. 室温下孵育30min
  10. 移去盖板,弃去孔内反应液,每孔加350ul的洗涤工作液洗板5次,然后彻底吸出孔内液体,或可采用全自动洗板机
  11. 每孔加100 ul的ELISA HRP 底物液
  12. 盖板,避免暴露于阳光下
  13. 室温下孵育20min
  14. 移去盖板,每孔加100 ul的终止液,混匀
  15. 10min 内在450nm酶标仪上检测吸收值
  1. 实验前病人样本和质控稀释100倍,见“试剂准备”;不要稀释标准品
  2. 将实验所需包被板固定于板架上
  3. 将10ul的标准品,稀释的样本,稀释的质控加于相应孔内
  4. 每孔加100ul的CRP酶联物
  5. 充分混合30秒,充分混合相当重要
  6. 室温下孵育45min
  7. 迅速弃去反应液,用去离子水或双蒸水洗板5次,不要使用自来水
  8. 吸水纸上拍干,去除残留液滴
  9. 每孔加100ul的TMB底物液,轻轻混合5秒
  10. 室温下孵育20min
  11. 每孔加终止液100ul
  12. 轻轻混合30秒,确保蓝色溶液全转变为黄色
  13. 15min内酶标仪上读数

注意:为降低背景色,可以双波长检测,设置参考波长:595nm 或620 nm 或630nm操作注意事项

结果计算

  1. 建议所有标准品,质控品和未知样本做双孔检测;各双孔检测的吸收均值用于数据处理,结果计算
  2. 将光敏试剂保持装于原琥珀色瓶内
  3. 将剩余的包被板条放存在含干燥剂的密封袋内,避免受潮
  4. 操作严格,移液器经校准可确保试验的可重复性
  5. 孵育时间或温度也可能会影响试验结果
  6. 避免微孔内产生气泡,可能会导致结合率低,双孔读数变异系数高
  7. 使用前所有试剂都应彻底混匀,避免产生气泡
  1. 计算各标准品,样本的平均OD值
  2. 以标准品的浓度为X轴,OD值为Y值,绘制标准曲线
  3. 样本浓度值可从标准曲线上直接得到;也可使用相关数据处理软件得到实验结果
  4. 所得样本浓度值还需乘以稀释因子100,而得到最终结果
  5. 若样本浓度高于10mg/L,需进一步稀释,所得结果需乘以1000
  6. 注意:病人样本CRP浓度低于0.1mg/L的记录为<0.1mg/LCRP

结果说明

标准曲线示范以下为以CRP的浓度为X轴,相应的吸光值为Y轴的典型标准曲线.提示:此标准曲线仅供演示说明用,不能用于未知样品的计算.每个实验室在每次实验都应建立自已的数据和标准曲线.图片 1

  1. 计算各双孔吸收值均值
  2. 所有的吸收均值都减去标准品1的吸收均值
  3. 在点对点或对数-对数坐标纸上以标准品的浓度为X轴,吸收均值为Y轴绘制标准曲线;或是采用数据处理软件进行结果计算

质控品和样本浓度可直接从标准曲线上读取,若采用的是对数-对数或数据处理软件计算则需用到对数转换;样本校正吸收值在浓度1ng/ml 和下一个最高标准品间的需通过公式计算:

未知样本浓度=

未知样本吸收值

x 2nd 标准品浓度值

2nd 标准品吸光值

典型标准曲线以下为典型示例的吸收值及标准曲线;此标准曲线不能用于其他实验的计算图片 2

#

稀释比例

检测值

期望值

回收率%

1

1:10,000

21.9

1:20,000

11.9

11.0

108

1:40,000

5.3

5.5

96

1:80,000

2.9

2.7

107

1:160,000

1.6

1.4

114

2

1:10,000

192

1:20,000

99.9

96

104

1:40,000

45.2

48

94

1:80,000

22.2

24

93

1:160,000

13.4

12

112

  1. 精密度

两个样本在一个试验中做20次重复检测,分析板内差异

胎球蛋白A均值 CV
33.6 5.5
121.1 4.8

两个样本双孔检测,做了12次检测,分析板间差异

胎球蛋白A均值 CV
32.4 6.8
123.7 5.7

4. 回收率两位患者血清加不同量的人胎球蛋白A ,检测,结果如下,ng/ml

# 原始值 加入的量 检测值 期望值 回收率%
1 33.6 21 25.1 27.3 92
63 44.4 48.3 92
200 120.1 116.8 103
2 121.1 21 68.9 71.1 97
63 88.6 92.1 96
200 157.1 160.6 98

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